Microscope inversé Zeiss, Axiovert 200

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Applications:

  • Suivi de cellules dans un plan au cours du temps : migration cellulaire (avec ou sans marqueur intracellulaire fluorescent).
    Visualisation d’un nombre important de cellules dans un même plan (x20, x40).
  • Suivi de l’évolution d’un (ou plusieurs) marqueurs intracellulaires fluorescents dans le volume cellulaire et au cours du temps (3D + temps).
    Visualisation d’un nombre limité de cellules dans un même plan (x63, x100, (-) contraste de phase).

    • Source:Lampe à vapeur de mercure à arc court (HBO 100) couplée à un régulateur de puissance (AttoArc 2) : variations de 1 à 100% (incrément = 1)
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    Platine motorisée :

  • Pilotage : unité MCU 28
  • La platine peut être déplacée avec un « joystick »
  • Mémorisation des coordonnées (x,y) d’une cellule
  • Possibilité de saisir des informations successivement dans plusieurs cellules, dans différents puits, à des intervalles de temps réguliers

    • Quatre objectifs :

  • LD Achroplan 20x, 0,40 Korr, Ph 2
  • LD Achroplan 40x, 0,60 Korr, Ph 2
  • Achroplan 63x, 0,95 w
  • PlanApochromat 100x, 1,4 oil

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    Excitation et émission :

    Pour l’excitation, les filtres sont disposés sur une roue externe motorisée (Lambda 10-2, Sutter Instrument Company) : gain de temps pour les doubles marquages
    Transmission:

  • CFP-YFP
  • Dapi
  • CFP
  • YFP
  • GFP (FITC)
  • DsRed (Rhodamine)
  • GFP-DsRed

    • Collecte des signaux :

  • Caméra CCD monochrome haute résolution CoolSNAPHQ (Roper Scientific), 12 bits, couplée à une carte vidéo de dernière génération
  • Station informatique PC (Optiplex G400X, Dell) : ajout de mémoire Logiciel de contrôle Métamorph (Roper Scientific)
  • Champ d’acquisition total
  • Choix d’une région d’intérêt (zoom)
  • Enregistrement numérique des images : stockage sans dégradation, importantes possibilités de traitement…
  • Caméra montée en « baseport »
  • Objectif Plan Apochromat x100, NA 1,4, oil immersion : équipé d’un système piezzo (PZ3, PI) permettant d’augmenter la vitesse d’acquisition en z
  • Mode d’acquisition « stream » : 3-4 fois plus rapide une série z de 60 images 12 bits 512 x 512 est acquise en : 7 sec (temps d’exposition = 100 ms) (au lieu de 30 sec) 13 sec (temps d’exposition = 200 ms) (au lieu de 40 sec)
  • Principe : pas de fermeture de l’obturateur entre chaque plan + stockage transitoire des images sur la mémoire vive de l’ordinateur puis écriture différée des données sur le disque dur
  • Inconvénient : les images n’apparaissent pas à l’écran pendant l’acquisition

    • Chambres de culture thermostatées

    Système FCS2, Bioptechs:

  • Contrôle de la température à plus ou moins 0.1 °C.
  • Possibilité d'injection.
  • Contrôle de la température de l'objectif à immersion.

    • Système ZEISS:

  • Enceinte thermostatée avec flux de CO2.
  • Contrôle de la température de la chambre d'incubation

    •  1

  • Contrôle de la température de l'objectif à immersion

    • 2

  • Différents adaptateurs:
    • Boîte de Pétri à fond de verre.

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    • Plaques à multi-puits : 12 puits ou 6 puits.

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